odyssey 和biorad 凝胶成像ed成像系统哪个好

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-04-04 04:46 标签： bio red
一.Odyssey红外成像系统技术特点；一般的荧光染料的激发和检测波长都位于可见光谱区，；主要特点；1．高灵敏度,效果同于或者好于化学发光法，但不需；2．直接检测，无需曝光和显色底物，不需要X光片，；3．双色检测，可以在一次杂交中同时检测两种目的分；4．宽广的线性范围，可用于高准确性定量；5．背景低，图像清晰，激光强度可调，不会丢失弱的；6．强有力的软件支持
一. Odyssey红外成像系统技术特点
一般的荧光染料的激发和检测波长都位于可见光谱区，在此波长范围内，化学高分子物质（膜、胶、微孔塑料板等）也会发出荧光，因此易产生高背景的荧光干扰，从而不能有效用于膜上蛋白或者核酸的直接荧光成像。而在红外波长区这些大分子物质几乎不发出任何荧光信号，使得红外荧光染料在长波下检测时背景荧光很低，具有很好的信噪比，这一特点使得核酸和蛋白的膜上荧光检测成为可能。LI-COR根据红外荧光的这一特点开发出Odyssey红外成像系统，独特的采用2个红外激光作为激发光源，以扫描成像方式对样品进行检测。样品载体可以是膜、凝胶和微孔板。该系统配置的2个红外激光激发光源，激发光波长分别为680nm和780nm，配置的2个高灵敏度光敏二极管可以分别检测720nm和820nm的发射荧光，因而Odyssey可同时检测两种IRDyes染料的荧光信号。IRDyes染料的最大吸收值与Odyssey的两个红外激光器680nm和780nm激发波长相匹配，其发射光波长又与Odyssey的两个光敏二极管检测波长相匹配，与同时IRDye700和IRDye800的发射波长峰值相隔100nm，因此Odyssey可以给出最大的灵敏度和最小的信号交叉。同时由于采用二极管激光器和固态检测器，Odyssey具有很长的使用寿命（激光器使用寿命约4-6万小时），而系统维护的要求却很低。该系统可广泛应用于信号传导，蛋白磷酸化分析，In-Cell-Western分析等蛋白领域研究。
1．高灵敏度,效果同于或者好于化学发光法，但不需信号放大步骤，信噪比高。
2．直接检测，无需曝光和显色底物，不需要X光片，不需要暗房，没有放射性废料产生。
3．双色检测，可以在一次杂交中同时检测两种目的分子，直观，省时。
4．宽广的线性范围，可用于高准确性定量。
5．背景低，图像清晰，激光强度可调，不会丢失弱的信号
6．强有力的软件支持，结果分析如确定分子量和定量及图象处理编辑很容易
7．系统操作和维护简单
Odyssey的应用
应用领域：蛋白质研究，核酸研究
具体包括：Western分析，In-Gel Western分析，蛋白质定量分析，双色磷酸化
分析，考马司亮兰胶的扫描，蛋白双向电泳，双色 EMSA，双色微孔
板分析，BD PowerBlot Analysis，Northern Blot，Southern Blot
二．系统安装条件
1. 位置要求：稳定水平的操作平台放置设备，远离热源，避免阳光直射
2. 空间及载重要求：
操作平台尺寸（长×宽×高）：80×70×80cm
操作平台载重：40kg
3. 温度要求：15-25℃
4. 湿度要求：不超过60%
5. 电源：90-250V AC，47-63Hz。
6. 其它：通用插头接线板（至少3个插孔）`
三．培训所需试剂设备及样品
Western Blot实验所需试剂耗材：
客户自备的蛋白样品(建议为新鲜制备的蛋白，最好用western验证过) 细胞裂解液
SDS-Page胶
电泳缓冲液
PVDF膜(硝酸纤维素膜也可)
转移缓冲液
封闭液（建议使用5%进口脱脂奶粉）
荧光标记的二抗（IRDye700和IRDye800）
（通用试剂详细配方请参照《分子克隆实验指南》）
其它配套设备：
1) 蛋白电泳仪
2) 脱色摇床
4) 分子生物学实验室常用工具：
加样器，Tip头，量筒，离心管，离心机，冰盒等。
以上物品请您提前准备妥当，我们将使用以上物品进行仪器使用的培训工作。
四、培训程序及时间安排
（请至少安排2名实验室长期工作人员参加培训，方便以后有人员变动您也能进行仪器内部培训。）
1. 仪器安装及使用培训（2小时）
2. 实验安排布置，用户实际操作培训（不同的实验时间有所不同，以Western Blot为例，时间为1天半）。实验的安排上建议同时做红外荧光检测与化学发光检测的对比实验，方便两种方法结果的对比。
3. 软件基本功能综述及使用培训（1小时）
五、仪器及试剂系统介绍
1. Odyssey红外成像系统技术特点讲解
2. 仪器系统组成和工作原理讲解
3. 配套试剂介绍
六． 实验操作流程
实验设计：化学发光及荧光检测对比实验
1先将蛋白样品做3个浓度梯度稀释如1：10，1：100，1：1000，加上未稀释的蛋白共4个实验样品，再加上预染marker我们称之为一组样品
2蛋白电泳上样的顺序为预染marker，未稀释样品，1：10，1：100，1：1000，预染marker，未稀释样品，1：10，1：100，1：1000（两组样品中间建议空一个样品孔，方便以后的剪膜）
3转膜完成后，开始进行封闭及一抗孵育的操作步骤
4一抗孵育及洗膜完成之后，将两组样品膜剪开。两张膜分别按照荧光检测及化学发光检测的方式进行二抗的孵育，洗脱及结果的分析。Western的实验流程可以参照下面的荧光检测Western操作流程，部分化学发光的实验流程请参照所在实验室的方法。
荧光检测Western操作流程（以硝酸纤维素膜为例）：
1. 吸去培养液，用预冷的PBS洗细胞两次
2. 加入细胞裂解液，4℃放置20min
3. 用细胞铲刮下细胞，转移到1.5ml离心管，13000rpm，4℃，20min
5. 取20-100μg蛋白进行电泳
6. 电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）按分子克隆实验手册操作
7. 硝酸纤维素膜于转移缓冲液（PBS）中平衡20min。（如果使用PVDF膜，请先用甲醇浸湿，再用去离子水冲洗后转移到转移缓冲液中平衡20min。）
8. 电泳胶置转移缓冲液中平衡20min。
9. 裁两张与胶同样大小的滤纸,置转移缓冲液中平衡。
10. 转膜顺序：负极－专用滤纸－电泳胶－PVDF膜－专用滤纸－正极。15V，电转30min。
11. 电转后，封闭液中封闭1～3hour。
注：封闭液可以用5%的进口脱脂奶粉（用PBS溶解），因为Tween-20和BSA会对Odyssey造成高背景，所以在封闭完成前尽量不要让膜接触到这两种物质，所以麻
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