细菌回复实验加S9的目的是什么

mutation) 引起DNA链上一个或几个碱基对的置换 碱基置换有转换(transition)和颠换(transversion)两种形式。 转换是DNA链上的一个嘧啶被另一嘧啶所替代或一个嘌呤被另一嘌呤所代替。 颠换是DNA链上的一个嘧啶被另一嘌呤所替代或一个嘌呤被另一嘧啶所代替。 3.4 移码突变( Frameshift mutation) 引起DNA链上增加或缺失一个或多个碱基对 3.5 鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试驗( Salmonella typhimurium/reverse mutation assay) 利用一组鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型试验菌株测定引起沙门氏菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的组氨酸缺陷型(his-)→原养型(his+)回複突变的试验方法。 3.6 S9 经多氯联苯(PCB混合物)或苯巴比妥钠和β-萘黄酮结合诱导的大鼠制备肝匀浆在9000g下离心10min后的肝匀浆上清液。 4 原理 鼠伤寒沙門氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸故在缺乏组氨酸的培养基上,仅少数自发回复突变的细菌生长假如有致突变物存在,则营養缺陷型的细菌回复突变成原养型因而能生长形成菌落,据此判断受试物是否为致突变物 某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变, 故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液 5 仪器和设备 培养箱、恒温水浴、振荡水浴摇床、压力蒸汽消毒器、干热烤箱、低温栤箱(-80℃) 或液氮生物容器、普通冰箱、天平(精密度0.1g和0.0001g)、混匀振荡器、匀浆器、菌落计数器、低温高速离心机,玻璃器皿等 6 培养基和试剂 6.1 1000mL 配淛:先将前三种成分加热溶解后,再将溶解的硫酸镁缓缓倒入容量瓶中加蒸馏水至1000mL。于0.103MPa下高压灭菌30min储于4℃冰箱。 6.4 20%葡萄糖溶液 成分:葡萄糖 200g 加蒸馏水至 1000mL 配制:加少量蒸馏水加温溶解葡萄糖再加蒸馏水至1000mL。于0.068MPa下高压灭菌20min储于4℃冰箱。 6.5 底层琼脂培养基 成分:琼脂粉 7.5g 蒸馏水 480mL V-B培养基E 10mL 20%葡萄糖溶液 10mL 配制:首先将前两种成分于0.103MPa下高压灭菌30min后再加入后两种成分,充分混匀倒底层平板按每皿25mL制备平板,冷凝固化后倒置于37℃培养箱中24h备用。 6.6 营养肉汤培养基 成分:牛肉膏 2.5g 胰 胨 5.0g

我要回帖

 

随机推荐