G+细菌总DNA提取，跑胶是这个样子，急求各位大神看看是什么问题 - 实验交流 - 生物秀
标题: G+细菌总DNA提取，跑胶是这个样子，急求各位大神看看是什么问题
摘要: [G+细菌总DNA提取，跑胶是这个样子，急求各位大神看看是什么问题] 提取方法如下：（G+细菌）1）将培养物室温10,000 rpm离心3 min，弃上清，沉淀重新悬浮于100 μL 1×TE（pH8 0）中；2）加入10 μL 50 mg mL的溶菌酶，37oC水浴1 h；3）加入10% SDS 100 μL，20 mg mL的蛋白酶K 5 μL，37oC水浴 关键词:[细菌 上清 跑胶 氯仿 降解 上清液 异戊醇]……
提取方法如下：（G+细菌）
1）将培养物室温10,000 rpm离心3 min，弃上清，沉淀重新悬浮于100 μL 1×TE（pH8.0）中；
2）加入10 μL 50 mg/mL的溶菌酶，37oC水浴1 h；
3）加入10% SDS 100 μL，20 mg/mL的蛋白酶K 5 μL，37oC水浴30 min；
4）加入5 mol/L NaCl 100 μL；
5）加入等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），颠倒混匀，室温静置5 min，12,000 rpm离心10 min，将上清液转移至干净的中；
6）加入等体积氯仿:异戊醇（24:1），室温静置5 min，12,000 rpm离心10 min，转移上清液至干净的中；
7）加入0.6倍体积的异丙醇，颠倒混匀，室温静置10 min，12,000 rpm离心10 min，弃上清；
8）加入1 mL 75%乙醇洗涤沉淀，12,000 rpm离心5 min，弃上清；重复洗涤2次；
9）开盖晾干，加入50μl ddH2O或TE溶液溶解DNA，-20oC保存。
提取完毕后，直接用1%的糖胶看结果，胶图很诡异，Marker最上面那一条是5000 bp，5000 bp上面的应该是基因组；那两条特别亮的大约的样子，1500上方还有两条很弱的带，请各位大神看看到底哪里出了问题，这样的提取结果太诡异了！！
dna.jpg回复RNA污染
RNA的大小不能看 marker，从这个pattern看就是RNA回复谁说提RNA非要那么费劲了？酒精对保护RNA有效果么？抽个RNA本来就是个很放松的事情。
加点RNaseA，第一步把菌悬起来的时候就可以加，浓度可以参考抽质粒的buffer，如果还是不行，在最后一步溶解DNA的时候可以再加。浓度可以更高一点。
因为你这个分离程序，本质上说，是核酸的分离程序，并不针对RNA还是DNA，所以有RNA污染几乎是必然。
同时需要看你下一步的用途，如果仅仅是做个模板搞PCR，就这样就可以了，因为RNaseA切断的RNA也不会切成NTP，旺旺都是100 nt左右大小的碎片，如果你要去除，还得想办法，最好是柱纯化，或者LiCL沉淀。回复
谁说提RNA非要那么费劲了？酒精对保护RNA有效果么？抽个RNA本来就是个很放松的事情。
加点RNaseA，第一步把菌悬起来的时候就可以加，浓度可以参考抽质粒的buffer，如果还是不行，在最后一步溶解DNA的时候可以再加 ... OK，我再瞅瞅，提RNA喷酒精什么的是为了清洁环境，防止RNA降解吧，费不费劲我不知道，不过看上去一般都是各种怕降解回复在这里遇到熟人……好囧……回复
在这里遇到熟人……好囧…… biostar2009也是你熟人？
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电话：021-　　特地注册一个号上来问问。我跟男朋友在一起还没一个月，我们异地。然后他年28就回家了，回家以后那天晚上给我发个信息就睡了，然后昨天一天没理我，昨晚我九点钟还发信息给他在不在，忙不忙？他没回，我以为他跟同学朋友出去玩了我就等他到三点多还发信息给他怎么还不回家，估计4点多我困的不行就睡了。今天早上起来看到三条扣扣信息，他说对不起，昨晚困了就很早睡了。然后就没然后了，直到现在不管我发短信还是发信息他都不会回。他这是真忙还是什么意思呀，我第一次谈恋爱，不知道为什么会这样，我好想他总想打电话给他发信息给他。可是也好难过
楼主发言：131次 发图：0张
　　这是什么个情况，各位能帮我分析吗，是我想多了吗，我总觉得我是被甩了的节奏！！！　　
　　大过年的应该都出去玩了吧？没人看吗？我也好想出去玩，可是没有心情，我好想他，他不理我　　
　　打电话呗　　
　　不算吧。。如果这样都算分手那他真的是个渣男了！受不了就问清楚吧，跟他讲清楚
　　不看好 　　
　　是男朋友
有什么好犹豫的
　　还没有一个月，有什么好难过呢。　　
　　渣男…　　
　　个人觉得，春节忙可以理解　　but：回个短信给个电话的时间也还是有的
　　问清楚吧，跟他讲清楚
　　@奇葩的一个大家族
15:06:00　　不算吧。。如果这样都算分手那他真的是个渣男了！受不了就问清楚吧，跟他讲清楚　　—————————————————　　我不敢问了，我问了他就说是我想太多。可是现在大过年的。他打电话给我说句新年好都不行吗？我打电话他不接我不敢打，不然要说我没有给他空间　　
　　应该是过年真的忙吧
　　@疯吹过的夏天
15:07:00　　还没有一个月，有什么好难过呢。　　—————————————————　　第一次谈恋爱，我也不知道这是不是正常的，我就是觉得挺委屈　　
　　@八皢铥
15:08:00　　个人觉得，春节忙可以理解 　　but：回个短信给个电话的时间也还是有的　　—————————————————　　对啊，他就是没回的，电话也不接的，我不知道我是不是被分手了　　
　　@三十而萝莉
15:10:00　　应该是过年真的忙吧　　—————————————————　　希望是我想多了，　　
　　如果过了今晚，我发信息他还是没回，还不联系我的话。我就是被分手了吗？　　
15:08:00　　渣男…　　—————————————————　　这不算渣男吧，只能说明他不够喜欢我　　
　　@孤魂人间
15:08:00　　问清楚吧，跟他讲清楚　　—————————————————　　我问了，他都不理我。他也没说忙，就是说会跟朋友出去聚会　　
　　@阿狸不能哭
15:09:57　　@奇葩的一个大家族
15:06:00　　不算吧。。如果这样都算分手那他真的是个渣男了！受不了就问清楚吧，跟他讲清楚　　—————————————————　　我不敢问了，我问了他就说是我想太多。可是现在大过年的。他打电话给我说句新年好都不行吗？我打电话他不接我不敢打，不然要说我没有给他空间　　-----------------------------　　额~~会不会带了别的姑娘回家过年啊！所以不方便接你短信和电话？猜测。。。。
　　不可能吧？我觉得他不是这样的人，我想他只是不喜欢我吧，不过也是他追我的，当初真的对我很好，可是一个月都没有，热恋期这么短吗　　
　　@阿狸不能哭 20楼
15:18　　不可能吧？我觉得他不是这样的人，我想他只是不喜欢我吧，不过也是他追我的，当初真的对我很好，可是一个月都没有，热恋期这么短吗　　------------------------------　　好想呵呵。还是呵呵吧
　　床单滚了没？　　
　　才一个月，他不理你你也别上赶着找他了。
　　问问各位。你们男朋友会不会这样的？是因为真的忙吗？问各位男同筒子，你们也是因为过年真的忙所以不会联系自己女朋友吗　　
　　你第一次给他发的时候
他没回 就不该继续等他到3点了 人家不还是好好的?　　别太主动
自己也忙起来
　　到底是没经验 哎
　　@微笑着愤怒
15:21:00　　床单滚了没？　　—————————————————　　没有没有，亲都没有→_→　　
　　@阿狸不能哭
15:09:57.0　　我不敢问了，我问了他就说是我想太多。可是现在大过年的。他打电话给我说句新年好都不行吗？我打电话他不接我不敢打，不然要说我没有给他空间 　　—————————————　　热恋要空间干啥。热恋还要空间那以后过日子不如相近如宾好了。。果断打电话问清楚。最讨厌忽冷忽热的人了。　　
　　@格格家的宝贝
15:21:00　　才一个月，他不理你你也别上赶着找他了。　　—————————————————　　好想骂人呀，这是什么初恋呀。！！呜呜~(&_&)~　　
　　@晒太阳的喵米米
15:22:00　　@阿狸不能哭
15:09:57.0 　　我不敢问了，我问了他就说是我想太多。可是现在大过年的。他打电话给我说句新年好都不行吗？我打电话他不接我不敢打，不然要说我没有给他空间 　　————————————— 　　热恋要空间干啥。热恋还要空间那以后过日子不如相近如宾好了。。果断打电话问清楚。最讨厌忽冷忽热的人了。　　—————————————————　　打电话不接我电话的→_→要是我再打就会说我不懂事了　　
　　我前男友就是 打电话没接到从来不回一个的 而且我不打电话他他也不会打电话我 跟他说了三四次哦 完全没有改的意思　　然后我...呵呵 三天不联络自动分手 没联系了拉黑了　　
　　@薨无敌
15:22:00　　你第一次给他发的时候 他没回 就不该继续等他到3点了 人家不还是好好的? 　　别太主动 自己也忙起来 　　到底是没经验 哎　　—————————————————　　我也有自己的朋友圈跟节目，但是我总是想着他，想他为什么不理我，所以这个年过得好不开心→_→　　
15:24:00　　我前男友就是 打电话没接到从来不回一个的 而且我不打电话他他也不会打电话我 跟他说了三四次哦 完全没有改的意思 　　然后我...呵呵 三天不联络自动分手 没联系了拉黑了　　—————————————————　　抱抱，我想我也是快要分手了吧，每次都是我主动联系他，现在我联系他也不回了。今天还是过年。他打电话或发信息给我说句新年快乐都不行吗？　　
　　我觉得可能快了。。。　　
　　也许是真的忙啊，不过不至于忙到不回复。打电话问问啊，打电话最好了，短信微信隔着屏幕连语气都听不出来呢。　　还有你新年了也要有自己圈子生活啊，不要一直围着他转嘛。
　　昨天昨晚一整天没有联系，没回我信息，觉得快要分手了，昨晚单曲循环《以后的以后》，哭了好久～　　
　　他對你是可有可無的態度　　其他的不清楚　　你自己心底該有個數
　　@龙大静
15:29:00　　也许是真的忙啊，不过不至于忙到不回复。打电话问问啊，打电话最好了，短信微信隔着屏幕连语气都听不出来呢。 　　还有你新年了也要有自己圈子生活啊，不要一直围着他转嘛。 　　—————————————————　　嗯，我有自己的生活自己的圈子，可是他一直不跟我联系，我会乱想。希望我想多了　　
　　不看好，才一个月就这样　　
　　@dora0609
15:27:00　　我觉得可能快了。。。　　—————————————————　　好想哭　　
　　@阿狸不能哭
15:22:17　　没有没有，亲都没有→_→　　—————————————　　那就坚持住底线，毕竟才一个月不到时间太短了。才谈恋爱容易患得患失，这也正常。心放开，大气一点，该干嘛干嘛，男人大部分都是你跑他追你追他跑。如果一直不联系，这就更没什么好纠结留恋的，就是个小插曲。　　
　　@p9deer
15:29:00　　他對你是可有可無的態度 　　其他的不清楚 　　你自己心底該有個數　　—————————————————　　那现在我是等他联系我呢，还是我再打个电话给他？我怕我联系他太频繁了会让他觉得有压力　　
　　@微笑着愤怒
15:33:00　　@阿狸不能哭
15:22:17 　　没有没有，亲都没有→_→ 　　————————————— 　　那就坚持住底线，毕竟才一个月不到时间太短了。才谈恋爱容易患得患失，这也正常。心放开，大气一点，该干嘛干嘛，男人大部分都是你跑他追你追他跑。如果一直不联系，这就更没什么好纠结留恋的，就是个小插曲。　　—————————————————　　那我现在也不再联系他了，他想找我我也会理他。如果他一直不联系我就当分手了吗？　　
　　@南方可人
15:31:00　　不看好，才一个月就这样　　—————————————————　　我现在也觉得我们没有未来了，本来想好过完年以后去他的城市找工作的，真是傻　　
　　＠李铃铛　　
　　@阿狸不能哭
15:33:32　　@p9deer
15:29:00　　他對你是可有可無的態度　　其他的不清楚　　你自己心底該有個數　　—————————————————　　那现在我是等他联系我呢，还是我再打个电话给他？我怕我联系他太频繁了会让他觉得有压力　　-----------------------------　　想打就打啊~　　要是他有壓力就有壓力啊~　　大到想分手就分手嘛~　　感情還不深~ 別患得患失的
　　@p9deer
15:39:00　　那现在我是等他联系我呢，还是我再打个电话给他？我怕我联系他太频繁了会让他觉得有压力 　　----------------------------- 　　想打就打啊~ 　　要是他有壓力就有壓力啊~ 　　大到想分手就分手嘛~ 　　感情還不深~ 別患得患失的 　　—————————————————　　我也怕就是打电话说开以后就是分手，现在不敢打。希望他今晚会找我，谢谢你　　
　　@p9deer
15:39:00　　那现在我是等他联系我呢，还是我再打个电话给他？我怕我联系他太频繁了会让他觉得有压力　　-----------------------------　　@阿狸不能哭
15:41:56　　想打就打啊~　　要是他有壓力就有壓力啊~　　大到想分手就分手嘛~　　感情還不深~ 別患得患失的　　—————————————————　　我也怕就是打电话说开以后就是分手，现在不敢打。希望他今晚会找我，谢谢你　　-----------------------------　　不是妳的也留不住的　　留來留去留成愁~ 留著幹嘛???　　用來揪心? 　　閒著也是閒著有點是揪心就不空虛　　想打怎不敢打啊?! 這算情侶嗎?
　　@p9deer
15:45:00　　我也怕就是打电话说开以后就是分手，现在不敢打。希望他今晚会找我，谢谢你 　　----------------------------- 　　不是妳的也留不住的 　　留來留去留成愁~ 留著幹嘛??? 　　用來揪心? 　　閒著也是閒著有點是揪心就不空虛 　　想打怎不敢打啊?! 這算情侶嗎?　　—————————————————　　如果我打电话给他现在正在忙呢，所以我不敢说分手，如果因为这样分手就是我无理取闹，过年本来就忙，我不给他好好过年？　　
　　@p9deer
15:45:00　　我也怕就是打电话说开以后就是分手，现在不敢打。希望他今晚会找我，谢谢你 　　----------------------------- 　　不是妳的也留不住的 　　留來留去留成愁~ 留著幹嘛??? 　　用來揪心? 　　閒著也是閒著有點是揪心就不空虛 　　想打怎不敢打啊?! 這算情侶嗎?　　—————————————————　　好纠结呀，唉，还不如一个人的时候过得开心　　
　　大过年的在家陪陪家人，谈了一个月就跟没了魂似的。人家也许陪家人，你在干嘛，想男人！女人矜持点！半个月不理他，看他急不急。
　　@p9deer
15:45:00　　我也怕就是打电话说开以后就是分手，现在不敢打。希望他今晚会找我，谢谢你　　-----------------------------　　@阿狸不能哭
15:49:10　　不是妳的也留不住的　　留來留去留成愁~ 留著幹嘛???　　用來揪心?　　閒著也是閒著有點是揪心就不空虛　　想打怎不敢打啊?! 這算情侶嗎?　　—————————————————　　如果我打电话给他现在正在忙呢，所以我不敢说分手，如果因为这样分手就是我无理取闹，过年本来就忙，我不给他好好过年？　　-----------------------------　　又沒叫你提分手　　聊聊天而已啊~ 　　想聊天就打電話給他嘛~　　你這樣子患得患失的幹嘛???　　想做甚麼就做甚麼啊~　　沒事跟他提分手幹嘛???
　　@流浪的烤鸭
15:52:00　　大过年的在家陪陪家人，谈了一个月就跟没了魂似的。人家也许陪家人，你在干嘛，想男人！女人矜持点！半个月不理他，看他急不急。　　—————————————————　　好吧，那我也出去了　　
　　@p9deer
15:53:00　　如果我打电话给他现在正在忙呢，所以我不敢说分手，如果因为这样分手就是我无理取闹，过年本来就忙，我不给他好好过年？ 　　----------------------------- 　　又沒叫你提分手 　　聊聊天而已啊~ 　　想聊天就打電話給他嘛~ 　　你這樣子患得患失的幹嘛??? 　　想做甚麼就做甚麼啊~ 　　沒事跟他提分手幹嘛???　　—————————————————　　我是怕他提，？。我也出去玩了，不纠结了　　
　　其实，这叫做：我还没那么爱你，你先进入了热恋期！　　
　　@p9deer
15:53:00　　如果我打电话给他现在正在忙呢，所以我不敢说分手，如果因为这样分手就是我无理取闹，过年本来就忙，我不给他好好过年？　　-----------------------------　　@阿狸不能哭
15:59:34　　又沒叫你提分手　　聊聊天而已啊~　　想聊天就打電話給他嘛~　　你這樣子患得患失的幹嘛???　　想做甚麼就做甚麼啊~　　沒事跟他提分手幹嘛???　　—————————————————　　我是怕他提，？。我也出去玩了，不纠结了　　-----------------------------　　新年快樂!
　　才一个月，还是他追的你，你就爱他爱成这样啦…　　
　　估计是没把你看得太重，男生如果真喜欢了，不会这么冷淡的。要不你也冷淡点试试～～
　　@p9deer
16:01:00　　我是怕他提，？。我也出去玩了，不纠结了 　　----------------------------- 　　新年快樂!　　—————————————————　　新年快乐　　
　　@我若为王你必为后
16:18:00　　才一个月，还是他追的你，你就爱他爱成这样啦…　　—————————————————　　额，我也觉得我太过依赖他了，这样不好　　
　　@syd_double
16:32:00　　估计是没把你看得太重，男生如果真喜欢了，不会这么冷淡的。要不你也冷淡点试试～～　　—————————————————　　谢谢啊，我忍住不联系他！！　　
　　谢谢回复我的筒子们！！新年快乐，楼主去收红包啦啦啦　　
　　不管分没分 只是能看出来他并不在乎你　　
　　@p9deer
15:53:00　　如果我打电话给他现在正在忙呢，所以我不敢说分手，如果因为这样分手就是我无理取闹，过年本来就忙，我不给他好好过年？　　-----------------------------　　@阿狸不能哭
15:59:34　　又沒叫你提分手　　聊聊天而已啊~　　想聊天就打電話給他嘛~　　你這樣子患得患失的幹嘛???　　想做甚麼就做甚麼啊~　　沒事跟他提分手幹嘛???　　—————————————————　　我是怕他提，？。我也出去玩了，不纠结了　　-----------------------------　　我那男朋友也是，我还嘲笑他回老家了跟脱缰的野驴一样，早晚被人拖去宰了。他不回复你你就别搭理他呗，我那个还好，睡觉前一定给我发个微信表示要睡觉了。但是我不高兴我也不回他，才一个月，你也别太上心就好
　　@十年灯火意未明
21:45:00　　我是怕他提，？。我也出去玩了，不纠结了 　　----------------------------- 　　我那男朋友也是，我还嘲笑他回老家了跟脱缰的野驴一样，早晚被人拖去宰了。他不回复你你就别搭理他呗，我那个还好，睡觉前一定给我发个微信表示要睡觉了。但是我不高兴我也不回他，才一个月，你也别太上心就好　　—————————————————　　那你们在一起多久呀？可能他也是真忙，所以也没敢多打扰他。你不回他他会说什么吗？　　
　　@等等你听我解释
17:56:00　　不管分没分 只是能看出来他并不在乎你　　—————————————————　　可能吧　　
　　到现在也没联系过我，他会不会是出什么事了？？？　　
　　你的情况跟我真是太像了
我也是第一次谈 现在已分 这种情况就是他没有原来那么喜欢你了 如果你现在找他说或者找他闹他只会更烦你
我觉得你可以先不忙理他 等他主动来找你 如果他还是不来找你的话那就真的
应该是真的想分手了　　
　　要我这暴脾气
就直接发 你出车祸还是出啥事了
短信 电话都回不了
反正正常恋爱是不会这样的
除非我以前谈的都是不正常的
　　@十年灯火意未明
21:45:00　　我是怕他提，？。我也出去玩了，不纠结了　　-----------------------------　　@阿狸不能哭
21:53:05　　我那男朋友也是，我还嘲笑他回老家了跟脱缰的野驴一样，早晚被人拖去宰了。他不回复你你就别搭理他呗，我那个还好，睡觉前一定给我发个微信表示要睡觉了。但是我不高兴我也不回他，才一个月，你也别太上心就好　　—————————————————　　那你们在一起多久呀？可能他也是真忙，所以也没敢多打扰他。你不回他他会说什么吗？　　-----------------------------　　也就几个月而已，他会拼命发微信问我怎么不理他啊。不过他是憨厚型的，所以我也不是太在意他是不是秒回信息。如果如楼上所说没有那么喜欢了，那就算了呗，反正我不缺人追。就这心态好了
　　@我有一只小毛驴呀
21:57:00　　你的情况跟我真是太像了 我也是第一次谈 现在已分 这种情况就是他没有原来那么喜欢你了 如果你现在找他说或者找他闹他只会更烦你 我觉得你可以先不忙理他 等他主动来找你 如果他还是不来找你的话那就真的 应该是真的想分手了　　—————————————————　　怎么分的呀？你说的还是他提的？我也明显觉得他不如以前喜欢我了　　
　　@小弱弱0257
21:57:00　　要我这暴脾气 就直接发 你出车祸还是出啥事了 短信 电话都回不了 反正正常恋爱是不会这样的 除非我以前谈的都是不正常的　　—————————————————　　我也不知道他怎么了，希望他是真的忙～等他联系我　　
　　@十年灯火意未明
22:07:00　　那你们在一起多久呀？可能他也是真忙，所以也没敢多打扰他。你不回他他会说什么吗？ 　　----------------------------- 　　也就几个月而已，他会拼命发微信问我怎么不理他啊。不过他是憨厚型的，所以我也不是太在意他是不是秒回信息。如果如楼上所说没有那么喜欢了，那就算了呗，反正我不缺人追。就这心态好了　　—————————————————　　我也不缺人追，当初跟他在一起因为他对我最好，他以前还会吃醋，可是一个月没到，他却变可　　
　　异地恋还说个屁啊　　
　　过年聚会吧，你不要理等，看看　　
　　回复第24楼，@阿狸不能哭　　问问各位。你们男朋友会不会这样的？是因为真的忙吗？问各位男同筒子，你们也是因为过年真的忙所以不会联系自己女朋友吗 　　--------------------------　　绝对不正常好么！　　
　　@2014纯真的世界
22:24:00　　过年聚会吧，你不要理等，看看　　—————————————————　　我在等呀，我除了等能干嘛呢　　
　　回复第71楼，@阿狸不能哭　　@小弱弱0257 68楼
21:57:00 　　要我这暴脾气 就直接发 你出车祸还是出啥事了 短信 电话都回不了 反正正常恋爱是不会这样的 除非我以前谈的都是不正常的 　　————————————————— 　　我也不知道他怎么了，希望他是真的忙～等他联系我 　　--------------------------　　大过年的就不想说你傻了，好好的姑娘干嘛找个渣男　　
　　@morrisABC
22:24:00　　异地恋还说个屁啊　　—————————————————　　额(⊙o⊙)…　　
　　@哈喽磊磊
22:25:00　　回复第24楼，@阿狸不能哭 　　问问各位。你们男朋友会不会这样的？是因为真的忙吗？问各位男同筒子，你们也是因为过年真的忙所以不会联系自己女朋友吗 　　-------------------------- 　　绝对不正常好么！　　—————————————————　　我也不知道他想怎么样，好累︶︿︶　　
　　@哈喽磊磊
22:28:00　　我也不知道他怎么了，希望他是真的忙～等他联系我 　　-------------------------- 　　大过年的就不想说你傻了，好好的姑娘干嘛找个渣男　　—————————————————　　真的是渣男吗？他除了没联系他他没做什么，他以前对我很好的，才一个月就变了，好难接受　　
　　@最爱吃酸梅糖
16:00:00　　其实，这叫做：我还没那么爱你，你先进入了热恋期！　　—————————————————　　他没我想像中的那么喜欢我　　
　　他前几天跟我说，他习惯了一个人的生活，所以不会主动联系我，他让我给他一点时间！！可是明明是他先追我的，他这样说　　
　　前途暗淡
　　楼主还是多忍忍，不要主动联系他，不能没底线
　　不接电话有点问题啊　　
　　@九两女王大人
23:09:00　　不接电话有点问题啊　　—————————————————　　我以为是我想多了　　
　　@天ya123
23:00:00　　楼主还是多忍忍，不要主动联系他，不能没底线　　—————————————————　　我现在没有找他，他也没有找我～　　
　　哇塞，他终于回了我扣扣信息！！他说“在在在”～我怎么回，我是不理他还是怎么样呀，求助呀　　
　　@阿狸不能哭
15:09:57.0　　我不敢问了，我问了他就说是我想太多。可是现在大过年的。他打电话给我说句新年好都不行吗？我打电话他不接我不敢打，不然要说我没有给他空间 　　—————————————　　你确定你是他的女朋友？或者说你确定他把你当做他的女朋友了吗？真是好笑，我觉得你一点脑子都没有，妥妥的没拿你当回事呀，你还犹豫个屁呀！　　
　　他说他刚睡醒，我听到就火了！宁愿睡觉，也没有发一条信息给我！我一怒之下说了分手。我说他习惯了一个人的生活，我就还他一个人的平静生活！　　
　　@贱人要害朕
23:51:00　　@阿狸不能哭
15:09:57.0 　　我不敢问了，我问了他就说是我想太多。可是现在大过年的。他打电话给我说句新年好都不行吗？我打电话他不接我不敢打，不然要说我没有给他空间 　　————————————— 　　你确定你是他的女朋友？或者说你确定他把你当做他的女朋友了吗？真是好笑，我觉得你一点脑子都没有，妥妥的没拿你当回事呀，你还犹豫个屁呀！　　—————————————————　　嗯，我刚刚说了分手了，我失恋了　　
　　@阿狸不能哭
15:27:10　　@u_
15:24:00　　我前男友就是 打电话没接到从来不回一个的 而且我不打电话他他也不会打电话我 跟他说了三四次哦 完全没有改的意思　　然后我...呵呵 三天不联络自动分手 没联系了拉黑了　　—————————————————　　抱抱，我想我也是快要分手了吧，每次都是我主动联系他，现在我联系他也不回了。今天还是过年。他打电话或发信息给我说句新年快乐都不行吗？　　-----------------------------　　楼主，趁早别联系了。给自己留点尊严吧
　　楼主真就是一个包子
　　@原创9527
23:57:00　　楼主真就是一个包子　　—————————————————　　我失恋了。抱抱。我甩的他　　
　　我说了分手，他还是懒得回我一句，应该就是默认了吧。好失败　　
　　哎　　
　　回复第20楼，@阿狸不能哭　　不可能吧？我觉得他不是这样的人，我想他只是不喜欢我吧，不过也是他追我的，当初真的对我很好，可是一个月都没有，热恋期这么短吗 　　--------------------------　　我觉得你可以晾他一两天　　
　　刚收到一条信息。还以为是他发的，还很紧张他发了什么，今晚的点开才发现是同学的祝福信息。呵呵　　
　　才一个月，他不理你，你也别理他不就行了　　
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